Skip to content

Mutacje trombomoduliny w nietypowym zespole hemolityczno-mocznicowym ad 5

2 miesiące ago

212 words

Komórki wyrażające trombomodulinę typu dzikiego zapewniały istotną ochronę w porównaniu z komórkami kontrolnymi. Warianty miały znacząco niższy procent iC3b na powierzchni komórki niż komórki typu dzikiego. Wartość P dla typu dzikiego dotyczy porównania trombomoduliny typu dzikiego z komórkami kontrolnymi. Inne wartości P służą do porównywania wariantów z trombomoduliną typu dzikiego. Przedstawione wyniki są wartościami średnimi z trzech niezależnych eksperymentów. W panelach B i C bezpośrednia interakcja CFH i C3b z trombomoduliną jest pokazana przez współstrącanie, a następnie immunoblotting, z użyciem immobilizowanej trombiny (IIa) -siarczanu w celu usunięcia trombomoduliny w obecności oczyszczonych białek (po .g). C3b oddziałuje z trombomoduliną, a interakcja ta jest zwiększona w obecności CFH (panel B). CFH bezpośrednio wchodzi w interakcję z trombomoduliną (panel C). Komórki HEK293 stabilnie transfekowano w celu uzyskania jednakowej ekspresji wariantów typu dzikiego i trombomoduliny, a preparaty błonowe unieruchomiono w 96-studzienkowych płytkach (Panel D). Wiązanie biotynylowanego C3b lub CFH oznaczono ilościowo za pomocą testu immunoabsorpcji enzymatycznej, jak opisano w sekcji Metody w dodatkowym dodatku. W porównaniu z wiązaniem z trombomoduliną typu dzikiego zaobserwowano znaczny wzrost specyficznego wiązania C3b lub CFH do wszystkich wariantów trombomoduliny (P <0,001) z wyjątkiem D486Y (P = 0,73 i P = 0,80, dla wiązania C3b i CFH do Odpowiednio D486Y). Niespecyficzne sygnały, określone komórkami wyrażającymi brak trombomoduliny, zostały odjęte od wyników. Testy przeprowadzono w trzech powtórzeniach. Zobacz Glosariusz, aby uzyskać wyjaśnienie składników dopełniacza. Aby sprawdzić, czy zmiany genetyczne THBD przyczyniają się do aktywacji dopełniacza, zbadaliśmy zdolność trombomoduliny typu dzikiego i zmutowanej do zapewnienia ochrony przed aktywacją dopełniacza na powierzchni komórki. 32-34 Komórki CHO-K1 były trwale transfekowane pustym wektorem ( kontrola) lub z ekspresją trombomoduliny wyrażającą wektor. Aktywację dopełniacza indukowano przez inkubowanie komórek z przeciwciałami przeciwko CHO wiążącymi dopełniacz, a następnie zubożoną w C6 surowicę. Barwienie całości C3b plus zinaktywowane C3b (iC3b) (z przeciwciałem anty-C3c, które rozpoznaje zarówno C3b, jak i i3b) i samego iC3b (ze specyficznym przeciwciałem anty-iC3b) określono ilościowo za pomocą cytometrii przepływowej. Ekspresja trombomoduliny typu dzikiego, w porównaniu z wektorem kontrolnym, spowodowała wzrost o medianę 2,6 (zakres od 2,4 do 2,7) w procentach C3b, który został rozszczepiony na iC3b na powierzchni komórki, jak obliczono stosunek iC3b do (C3b + iC3b) na barwienie (Figura 3A). Wskazuje to, że trombomodulina zapewnia ochronę przed aktywacją dopełniacza.
W porównaniu z komórkami CHO-K1, które transfekowano trombomoduliną typu dzikiego, wszystkie komórki, które transfekowano innymi wariantami trombomoduliny, były mniej skuteczne w przekształcaniu C3b w iC3b na powierzchni komórki po zainicjowanej kompleksem immunologicznym aktywacji dopełniacza (Figura 3A). .
Trombomodulina i C3b i CFH
Inaktywacja związanego z powierzchnią C3b zależy od wiązania CFH do cząsteczek siarczanu heparanu i C3b. Mutacje CFH związane z atypowym zespołem hemolityczno-mocznicowym zakłócają takie wiązanie z komórkami śródbłonka, zmniejszając zdolność CFH do supresji aktywacji dopełniacza.35 Ponieważ trombomodulina występuje na powierzchni wszystkich komórek śródbłonka, testowaliśmy, czy oddziałuje on z CFH i ułatwia CFI- pośredniczone cięcie C3b w celu uzyskania iC3b
[podobne: wdrożenia magento, nutraceutyki, laserowe obkurczanie pochwy ]

Powiązane tematy z artykułem: laserowe obkurczanie pochwy nutraceutyki wdrożenia magento